Descriere: 

Examenul morfologic al frotiului sanguin  colorat May Grunwald Giemsa evalueaza:

• eritrocitele: anomalii de marime, forma, structura, incluzii eritrocitare, continut de hemoglobina;

• leucocitele: anomalii structurale, prezenta de incluzii, prezenta formelor atipice, imature;

• trombocitele: anomalii de marime, de forma, de structura , de dispozitie pe frotiu.

 

Examinarea frotiului sanguin se realizeaza la solicitarea expresa a clinicianului precum si la mesajele de avertizare din hemoleucograma efectuata pe  analizorul automat  de hematologie (e.g., blaşti , limfocite atipice, deviere la stânga , eritroblaşti,etc).

 

Examenul morfologic al eritrocitelor

 

Eritrocitele normale morfologic apar ca: normocrome, normocitare, cu forma de disc biconcav, fara incluzii si anucleate. O serie de anomalii eritrocitare pot fi detectate prin examinarea microscopica a frotiului sanguin, astfel [2,11]:

 

Anomalia morfologica

Descriere

Fiziopatologie

Boli asociate

Anizocitoza    ( RDW-CV↑)

Variatii de marime

-----------

Anemii severe(e.g feriprive, hemolitice,etc)

Acantocite

Eritrocite cu spiculi (prelungiri citoplasmatice inegale si centru dens)

Alterarea stratului lipidic membranar

Abetalipoproteinemia, afectarea parenchimului hepatic, postsplenectomie.

Codocite sau hematii “ in tinta”

Hematii in semn de tras la tinta, hipocrome

Cresterea redundantei membranei celulare

Afectiuni hepatice, talasemie, postsplenectomie, hemoglobina C

Dacriocite

Hematii “in lacrima”

----

Anemia din mielofibroza

Eliptocite

Forma eliptica a eritrocitului

Proteine anormale din citoschelet

Eliptocitoza ereditara

Echinocite sau hematii crenelate

Eritrocite cu prelungiri / spiculi scurti, cu paloare centrala

Alterarea lipidelor membranare

Uzual sunt artefacte. Rar: uremia, carcinom gastric, deficit de piruvat-kinaza.

Hipocromia

Paloare centrala eritrocitara

Diminuarea sintezei de hemoglobina

Anemia feripriva, sideroblastica, talasemia

Incluzii: corpi Howell-Joly

Incluzii de obicei unice, mici, rotunde, bazofile

Remanenta nuclear (ADN)

Postsplenectomie, anemie megaloblastica, anemie hemolitica

Incluzii: Inele Cabot

Incluzii circulare (inelare)

Remanenta nuclear (ADN)

Postsplenectomie, anemie megaloblastica, anemie hemolitica

Microcitoza

Eritrocite mici, diam < 6µm, VEM<80 fL

---------------

Anemia feripriva, sideroblastica, talasemia, intoxicatia cu plumb, deficienta de vit B6

Macrocitoza

Eritrocite mari,diam > 8µm VEM >100 fL

Eritrocite tinere, tulburari de maturatie eritrocitara

Anemia megaloblastica, alcolism, boli hepatice, anemie hemolitica (reticulocite), hipotiroidism, etc

Megalocite

Eritrocite cu diam > 9 µm, ovale

 

Anemia megaloblastica

Policromatofilia

Hematii gri sau albastrui

Material ribosomal (hematii tinere)

Reticulocitoza

 Punctatii bazofile

Incluzii bazofile

Precipitarea ARN ribozomal

Intoxicatia cu plumb, talasemia

Hematii :in rulouri”

Dispozitia hematiilor asemeni  fisicurilor de monezi

Agregarea hematiilor de catre paraproteine

Paraproteinemia (mielom, macroglobulinemia Waldenstrom)

Schizocite

Hematii distorsionate, fragmentate

Distorsiuni mecanice in microcirculatie(depozite de fibrina, proteze mecanice)

Anemia hemolitica microangiopatica,  (CID – coagulare intravasculara diseminata, PTT – purpura trombotica trombocitopenica , proteza valvulara, arsuri grave)

Sferocite

Eritrocite sferice, fara paloare central, de diametru mai mic

Scaderea suprafetei membranare

Sferocitoza ereditara, anemia hemolitica imuna

Stomatocite

Eritrocite “cu gura”

Defect membranar cu permeabilitate cationica anormala

Stomatocitoza ereditara, anemia hemolitica imuna

Sickle-cells

Hematii “in secera”

Agregare moleculara  a hemoglobinei S

Sicklemie

 

 

 

Examenul morfologic al trombocitelor

 

Se evalueaza  morfologia trombocitara  si se apreciaza numarul  de trombocite pe frotiu   ( evaluare semicantitativa). Trombocitele  sunt  fragmente citoplasmatice de culoare albastru-bleu cu granulaţii fine  azurofile, cu diametrul de   2-4 µm, si forme variabile (frecvent sferice sau elipsoidale) . Numărul de trombocite  estimat pe frotiu este normal daca : prezenţa lor este  5 – 15 /camp de imersie sau  de 1 trombocit la 10-20 de eritrocite .[11]

  1. Megatrombocitele  ( > 4 µm diametru)
    1. Productie trombocitara accelerata
    2. Deficit de vit B12
    3. Sindroame mieloproliferative
    4. Trombocitopenia congeniatala (sindromul Bernard-Soulier)
    5. Purpura trombocitopenica imuna (PTI)
  2. Fragmente de megakariocite
    1. Mielofibroza
  3. Trombocite hipogranulare
    1. Sindrom  mielodisplazic
    2. Mielofibroza
  4. Trombocite cu forme bizare, cu granulaţii grosiere grupate central  :                                                                                                       
    1. Boli mieloproliferative   
    2. Postsplenectomie

 

Examenul  morfologic al leucocitelor.

 

Cele mai frecvente anomalii morfologice leucocitare sunt reactive, induse de infectii ori de toxicitatea unor substante chimice (e.g medicamente); mai rar intalnite sunt modificarile structural induse de o maturatie anormala (e.g.,asincronism nucleo/citoplasmatic) sau anomaliile congenitale.

 

●    Modificari de tip degenerativ :

  • Celule necrotice /picnotice (proba mai veche de 4 ore; uremie; sepsis)
  • Nuclei liberi (leucemie limfatica cronica, blastii din leucemia acuta, artefact)

 

●   Corpii Barr- material nuclear atasat nucleului, de forma unui “bat de tobosar”care apare doar la persoane de sex feminine (cu cromozom X dominant)

 

●   Neutrofile hipersegmentate ( > 5 lobi) asociat cu :

  • anemia megaloblastica/deficit de folat
  • chimioterapie anti-folat (e.g., methotrexat)

 

  ●  Neutrofile hiposegmentate (2 lobi)

  • Anomalia Pelger-Huët (ereditar)
  • Neutrofile pseudo-Pelger (sindrom mielodisplazic)

 

  ●  Neutrofile hipogranulare : neutrofil ce exprima rare granulatii si / sau absenta granulatiilor intracitoplasmatice.

  • asociate cu sindromul mielodisplazic

 

  ●   Anomalia Alder-Reilly: granulaţii azurofile şi bazofile mari, proeminente asemănătoare granulaţiilor toxice (pot fi prezente şi în limfocite şi monocite)

  • ereditară,  asociata cu anomalii osoase şi ale cartilajului
  • in  mucopolizaharidoze

 

  ●   Sindromul Chédiak-Higashi : incluzii eozinofile (lizozomi giganti) prezente in :Leucocite

  • Ereditar : albinism partial ocular si cutanat, susceptibilitate la infectii bacteriene si discrazie sanguina.

 

  ●   Neutrofile cu granulatii toxice (persistenta granulatiilor primare , frecvent  asociate cu  Corpi Döhle si cu vacuole)

  • Infectii severe sau distructii tisulare
  • Medicamente, mai ales factori de crestere granulocitara

 

   ●  Corpi Döhle ( incluzii citoplasmatice mici, albastre/gri, ovale sau iregulare)

  • infectii bacteriene, scaralatina, arsuri, traumatisme, sarcina, medicamente citotoxice
  • corpi Döhle de talie mare pot apare in anomalia ereditara May-Hegglin.

 

    ●  Vacuole intracitoplasmatice (contin enzime cu rol in fagocitoza)

 

    ●   Eritrofagocitoza ori bacteriofagocitoza – sunt fenomene caracteristice monocitului sau neutrofilului (ambele celule au receptori IgG/C3)

  • anemia hemolitica autoimuna la cald
  • lupus eritematos diseminat
  • sepsis

 

     ●   Limfocite atipice / reactive apar ca raspuns la diversi stimuli virali sau nonvirali

          Aspect morfologic: forma neregulata a citoplasmei si /sau a nucleului, citoplasma abundenta, bazofila, vacuole intracitoplasmatice, pattern cromatinian fin, uneori cu desen nucleolar (asemanator cu blastii)

  • infectii virale (Epstein-Barr, Citomegalovirus, hepatite virale)
  • reactive medicamentoase ori stimuli nonvirali (e.g.,toxoplasmoza)

 

     ●   Limfocite plasmocitoide (celula Turk) sunt forme intermediare de transformare a limfocitului B in plasmocit. Aspectul morfologic: nucleul este central, usor excentric, citoplasma intens bazofila este mai putin abundenta.

  • apare in sangele periferic dupa o stimulare antigenica intensa (e.g.,postvaccinare)
  • in macroglobulinemia Waldenstrom – ca celule maligne

 

●   Corpii Russel: incluzii roz, rosii sau incolore in citoplasma plasmocitului implicate in productia de imunoglobuline (celula Mott)

  • frecvent intalniti in mielomul multiplu

 

●   Plasmocitul cu citoplasma ”in flacara” (flame cells): plasmocit cu periferia rosie a   

     citoplasmei 

  • apare in mielomul multiplu cu IgA

 

●  Celula Rieder: nucleu cu ancosa

  • limfoame non-Hodkin leucemizate, unele leucemii acute

●  Corpii Auer: incluzii rosii purpurii de forma oval-alungita ce apare doar in citoplasma blastilor de linie mieloida; corpii Auer sunt formati prin fuziunea granulatiilor primare peroxidazo-pozitive.

  • prezenta corpilor Auer sugereaza leucemia acuta mieloida
  • corpii Auer multiplii apar in leucemia acuta promielocitara
Recomandari: 

Frotiul din sangele periferic se recomanda obligatoriu impreuna cu o hemoleucograma completa !

  • Evaluarea morfologiei eritrocitare in anemii.
  • Evaluarea morfologiei trombocitare in trombocitopenii
  • Cuantificarea (%) si descrierea morfologica a blastilor
  • Cuantificarea( % ) si descrierea limfocitelor  atipice in sindroamele mononucleozice
  • Descrierea anomaliilor structurale ale leucocitelor ,cuantificarea devierii la stanga a formulei leucocitare , precizarea tipurilor de granulocite imature.
Interferente analitice: 
  1. Artefacte determinate de o tehnica incorecta de intindere a frotiului
  • Distribuţie anormală a leucocitelor, cu dispunerea leucocitelor de dimensiuni mari pe marginile frotiului şi în franjuri.
  • Datorita etalarii necorespunzatoare, leucocitele de pe margini pot apărea mai mici decât în mod normal .
  • Distrugerea mecanica a celulelor cu prezenta de nuclei libere pe frotiu , in absenta unei fragilitati veritabile a celulei, (ca in leucemii).

 

2.Artefacte determinate de o tehnica incorecta de colorare

  • Celulele sunt colorate excesiv în albastru: timp prea lung de colorare, buffer prea alcalin (incorect preparat/vechi), frotiuri vechi sau frotiuri prea groase.
  • Aria dintre celule este colorată: spălare inadecvată a lamei, posibilă paraproteinemie.
  • Coloraţia apare prea roz/roşie: buffer prea acid, timp prea scurt de colorare/spălare excesivă a lamei4;5.

3.Artefacte determinate de  timpul prelungit de expunere la EDTA (probe vechi)

  • Artefacte ale eritrocitelor: hematii crenelate, hematii “în ţintă”,  stomatocite.
  • Artefacte ale trombocitelor: pot apărea mărite, mai slab colorate şi fără granulaţiile azurofile caracteristice.
  • Artefacte ale leucocitelor: vacuolizări / rupturi citoplasmatice, kariorexis nuclear. Monocitele apar cu numeroase vacuole şi/sau nucleu neregulat lobulat.
  • Limfocitele reactive continuă să se modifice morfologic pe măsură ce stau în contact cu EDTA, nucleul devenind convolut, iar citoplasma lărgită şi/sau vacuolată (se pot confunda cu celulele limfomatoase).
  • Nucleul limfoplasmocitelor poate deveni convolut / ”în formă de frunză de trifoi”